第 415 章 肢体重生? (第1/3页)
“.....我随后做了划痕实验,也就是SCratCh aSSay。先把目标菌铺成均匀的贴壁层,用无菌划痕工具在菌层中央制造线性缺口,同时设置未处理对照、培养基空白对照和热灭活样本对照。”
“划痕完成后,用延时摄影逐时间点记录,起始点、四小时、八小时、十二小时、二十四小时分别拍摄。图像分析不靠肉眼判断,计算闭合率、迁移面积和边缘推进距离。”
江承看着终端里的项目时间轴。
“....头一回是细线,我又划了一道宽的、一道圆的,深浅不一样,它都逐渐把缺口填平。缺口越窄、边缘细胞越密,收缩越快。”
“把每四小时那组照片按时间排列,能看到清楚的过程,先是边缘细胞改变形态,随后向缺口内迁移,最后由新生菌层完成闭合。多时间点、多个形状、多个深度,对照结果都一致,这才把它的修复能力钉在可见、可测、可重复的证据上。”
“您就把它当成修复因子了?”江承托着下巴,“老师,它为什么自己补得上?我从来没见过这种情况。”
“问到点子上了。”
孙汉章停了片刻,“但这个为什么,我还不敢拍胸脯说全懂。”
“....可能涉及细胞迁移、胞外基质重构、黏附蛋白表达,也可能存在特殊信号分子调控。我们已经检测到缺口边缘的代谢活动增强,细胞骨架发生重排,局部基质沉积也加快,可这些现象还不足以说明完整机制。”
他抬手点了点时间轴。
“到这一步我重复了多遍,每次刮取位置和深度都不同,结果仍然一致。可重复、可验证,才有资格往下走。”
江承把终端推到一边,语气里带着急切。
“那,您拿地球生物试了?”
“嗯,我用的试验品,就用了家畜。”
孙汉章把手撑在台沿上,他调出动物实验档案。
“本地养殖区一只母羊,后肢有长期开放性损伤,创口反复感染,肉芽组织生长差,饲养员已经在考虑淘汰。”
“我先做了基础清创和感染控制,确认全身状态稳定,再进入动物实验。SPF级动物条件下,先做小鼠和大鼠的体外相容性及局部给药筛查,随后才把羊只纳入组织修复观察。”
“...…不过,现在这种活菌不能直接进入活体。活菌进了活体,在哪儿落脚,会不会越过病灶向别处扩展,谁也不能打包票。”
“……所以我先做粗提液。菌体在受控条件下经过反复冻融,再配合超声裂解,让胞内成分释放出来。”
“……随后做差速离心,弃去大颗粒沉淀,保留上清。上清经过0.22微米无菌微滤,去除残余细胞和可培养活菌,再用不同截留分子量的超滤膜分级浓缩,记录每一组的截留分子量、浓缩倍数和回收率。”
“浓缩物还要做总蛋白定量?”
“当然!活性不能只用一支管子的体积描述,要按照总蛋白量、单位体积活性和单位蛋白活性分别标定。”
“每一批都先要做内毒素检测、无菌检验、支原体筛查和残余核酸检测。粗提液的活性标定仍然先做体外划痕实验,确认它能促进细胞层闭合,再进入动物剂量研究。”
孙汉章把三组动物曲线调出来。
“低、中、高三个剂量梯度,另设阴性对照。对照动物接受同样的清创、包扎和基础处理,只不给粗提液。”
“给药前要把动物品系、年龄、体质量、创面部位和损伤程度对齐。”
“每个嫦娥日同一时段做临床观察,体温、体质量、饮食、精神状态、创面面积、渗出液、结痂、肉芽组织、局部红肿和步态评分,都要记录。创面面积用标准化摄影结合图像分析,步态评分按承重、落地时间和跛行程度分级。”
“低剂量组反应轻,中剂量组愈合最顺,高剂量组局部炎症过强,体温升幅也过大。剂量存在治疗窗,不是越多越好。阴性对照组的
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